免疫球蛋白純化技術——純化小鼠腹水中單克隆抗體

PBS

緩沖液

層析柱高效液相色譜儀

1.  腹水10000 g離心10 min，除去細胞和雜質，在4 ℃條件下逐滴加入飽和硫酸銨溶液，使終濃度為40 ％飽和硫酸銨攪拌20～30 min

2.  離心，沉淀用40 ％飽和硫酸銨洗滌2次后溶于PBS，對緩沖液A（PH8.5 20 mM Tris緩沖液）透析除鹽4 ℃過夜

3.  用帶有1000 μl樣品環的高壓加樣活門將透析后粗提物加樣于經緩沖液A液平衡的TSK DEAE SPW離子交換層析柱

4.  洗脫流速1 ml/min
 

0～1 min：0→5％緩沖液B（20 mM Tris，PH8.5，含2.0 M醋酸鈉）
 

1～20 min（線性梯度洗脫）：5→20％緩沖液B
 

20～22 min：20→0％緩沖液B

5.  洗脫液用紫外280 nm進行監測

6.  收集蛋白峰，進行含量、純度和活性測定

1.  所用緩沖液和加樣粗提物均需0.22 μm濾膜過濾。

2.  在本實驗條件下，IgG1峰一般在線性梯度洗脫開始11～12 min。但不同類和亞類抗體以及不同特異性McAb的存留時間（retention time）有所差異。