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  • 發布時間:2019-04-04 22:38 原文鏈接: 從臍血來源多能祖細胞(CBMNCs)分離培養CD34+細胞實驗3

    實驗材料

    CD34+細胞

    試劑、試劑盒

    滅菌MSCs培養基絲裂霉素C100μg mL共培養的培養基細胞因子(干細胞因子IL-6Flt-3配體促血小板生成素)

    儀器、耗材

    6孔培養板

    實驗步驟


    (a)將臍帶血來源的間充質干細胞(blood-derived mesenchymal stem cells, CB-MSCs)作為飼養層細胞,用MSCs培養基重懸CB-MSCs,細胞濃度為5×104個細胞/mL。


    (b)將CB-MSCs接種到6孔板


    (C)每周兩次半量更換新鮮培養基。


    (d)當CB-MSCs達到以上匯合時,用10μg/mL絲裂霉素c處理,37℃ 2.5 h?


    (e)用無血清IMDM將CB-MSCs洗兩遍。


    (f)按1×104個/mL CD34+細胞重懸于含細胞因子的共同培養基(100 ng/mL干細胞因子,100ng/mL IL-6,50 ng/mLFlt-3配體,10 ng/mL促血小板生成素)。


    (g)將CD34+細胞接種到CB-MSCs飼養層細胞上。


    (h)每周兩次更換1/4培養基。


    (i)2周后,收集未貼壁細胞。

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