顯微切割(micro-desection)就是在顯微鏡下用手工或儀器采樣的方法從組織切片或細胞涂片上將所要研究的形態或表型相同的細胞從組織三維構造中分離出來,獲得純的細胞群(pure cell population),以備進一步作分子水平的研究。顯微切割技術的貢獻就是克服了組織的細胞成分非常繁雜這一重大的缺點。
一、顯微切割的方法
1.材料來源
微切割可用于福爾馬林固定石蠟包埋的組織切片、冰凍切片、培養細胞和細胞涂片。但所用載玻片不準涂抹任何粘附劑,常用的組織切片是HE染色的常規石蠟切片(厚5μm)。
2.切割及細胞采集方法
微切割及細胞采集方法大體上可分為手工操作和儀器操作兩大類。兩者各有長短。從兩個方面評價這些方法,一是準確性,即有無雜細胞污染;二是它的效率,能否在較短時間內采集到足夠的細胞;當然也要考慮方法所需費用。
(1)手工操作 就是用消毒的細針或刀片搔刮組織切片(厚5~15μm)上的細胞,并將其移至Eppendorf管中。
(2)儀器操作 利用激光進行微切割和細胞采集,其特點是微切割的精度高,可進行單個或幾個至數十個細胞的切割,可獲得很純的細胞群體,并適用于各種組織材料;再就是效率高,但儀器價格昂貴。具體又有4種不同的方法:①激光微光束微切割 ② 激光加壓彈射 ③貼于膜上的原組織微切割 ④激光俘獲微切割。
二、顯微切割的應用
1.細胞基因突變及微衛星變異的研究
2.細胞基因拷貝數的變化和甲基化水平的檢測
3.定量RT-PCR
4.比較基因組雜交
5.cDNA微陣列(芯片)
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