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  • 發布時間:2021-03-02 08:47 原文鏈接: 人源血清學檢測二抗的選擇標準(一)

           血清學檢測是許多健康問題診斷過程中的關鍵檢測方法,包括器官移植篩查,交叉匹配,疾病診斷,監測等。這些檢測在臨床決策中起著至關重要的作用,免疫分析是目前可用的最強大,最靈敏的血清學檢測方法之一,它基于抗原抗體之間的高度特異性結合,即使在低濃度下也能進行定性和定量檢測。有多種免疫測定方法,以下是其中最常見兩種檢測方法示意圖,分別是夾心法(圖1A)和直接法(圖1B),當選擇用于夾心法檢測的抗人二抗時(圖1A),需要考慮一抗的種屬,并使用與該物種有最小交叉反應的二抗。
     

     

     

    圖1:測定方式:A.夾心法,B.直接法

     

           免疫分析在多種疾病診斷起重要作用

     

           各類免疫測定技術各有優缺點,例如,快速測定法(如膠體金側向流動法)可在數min 內提供定性結果,可進行即時檢測,而ELISA可能需要花費數小時才能完成,但可提供定量數據。

     

     

           而當前嚴重急性呼吸系統綜合癥冠狀病毒2(SARS-CoV-2)大流行更加凸顯了側向流動分析的優勢,由于該疾病具有快速傳播和較高的死亡率等特征,美國FDA已采取相關措施,允許各州未經FDA批準就可開展新的SARS-CoV-2檢測。該修訂允許使用快速檢測試劑盒,該試劑盒定性檢測患者針對SARS-CoV-2產生的IgG和IgM抗體,從而顯著加大了SARS-CoV-2的檢測能力,盡可能地減少病毒的傳播。盡管側向流動檢測具有明顯的優勢,但這種分析方法無法提供定量的數據。

     

     

    表1.幾種類型的免疫測定法的優缺點,檢測過程,檢測的Ig類型
     

    免疫測定方法 檢測過程 可檢測免疫球蛋白
    快速測試/橫向流動(膠體金) 膠體金層析試紙條主要由4個部分組成:在樣品區滴加樣品后,借助毛細作用,樣品泳動至玻璃纖維膜,金標復合物溶解,并與樣品進行抗原抗體反應,形成復合物,繼續泳動至硝酸纖維素膜的檢測區,帶有金標記的復合物被檢測區抗原或抗體捕獲,呈現條帶。而質控線不管有無目的樣本,都會與金標抗體進行結合并顯色,相當于我們的陽性對照,證明金標抗體是正常的。 IgG,IgM
    流式細胞 將血清樣品添加到帶有抗原的細胞或磁珠中,樣本中的人源抗體會捕獲抗原,再加入熒光探針偶聯的二抗(圖1B),然后可以通過流式細胞儀分析熒光以給出定量數據。 IgG,IgM,IgA
    流動注射分析(FIA) 與流式細胞術相似,將樣品注射到含有固定抗原的柱子中,樣品中的人源抗體會與抗原結合(圖1B),再加入熒光探針或酶偶聯抗人的二抗進行檢測,用比色或熒光法進行檢測。 IgG,IgM,IgA
    ELISA法 將一抗固定在固體介質表面上,通常是微孔板,隨后會捕獲抗原(圖1A)或將抗原直接包被在板上(圖1B),與來自血清的人源抗體結合,加入酶標記的抗人二抗,最后,添加酶底物,從而得到與分析物濃度成正比的比色讀數。 IgG,IgM,IgA
    聚合酶鏈反應(PCR)該過程類似于ELISA,但是第二抗體是與寡核苷酸綴合。然后通過實時PCR進行DNA擴增和檢測。IgG,IgM,IgA


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