實驗方法原理 本法用異丙醇抽提血清TG,氧化鋁吸附磷脂及游離甘油氫氧化鉀皂化,過碘酸鈉氧化生成甲醛,甲醛與乙酸丙酮在氨離子存在下加熱生成黃色的 3,5二乙酰-1,4二甲基吡啶〔Hantgsch止反應)顯色程度與標本中TG濃度成正比。
實驗步驟
一、實驗試劑:
1. 異丙醇(分析試劑)
2. 氧化鋁(中性、層分用):用蒸餾水洗數次,傾去不易下沉的細顆粒,吸濾干后在110℃烘箱中活化至少8h,貯存于密閉容器或干燥器中
3. 50g/L 氫氧化鉀,內含異丙醇40%
4. 氧化劑:每升中含有無水醋酸銨77g 冰醋酸60ml,過碘酸鈉650ml
5. 顯色劑:乙酰丙酮0.75ml,異丙醇20ml,用蒸餾水稀釋至100ml,貯存棕色瓶內
6,三油酸甘油酯標準液(2.26mmol/l即200g/dl)精確稱取純三油酸甘油酯200mg,用異丙醇配成100ml,緊塞貯4℃冰箱中
二、實驗操作:
1. 抽提:方法同膽固醇相同
2. 皂化、氧化,顯色、測定管與標準管分別加人相應的抽提液1.0ml,空
白管中加異丙醇lml,各管中加人5Og/LKOH溶液O.2ml皂化,放置60℃水浴15min,冷卻后加入氧化劑0.5ml,混勻后加人顯色劑O.25ml,再混合,置60℃水浴中20min,取出冷卻。
3. 比色:波長410nm 1cm光徑比色杯,以空白管調零,讀取各管光密度。
三、計算:
血清甘油三酯=測定管吸光度/標準管吸光度×標準濃濃度
注意事項
1. 本法所用的皂化. 氧化. 顯色等試劑都很穩定,在室溫中可保存半年,但最好少量分裝使用,以減少試劑污染引起空白管色加深.
2. 皂化. 氧化與顯色的溫度和時間對顯色后的吸光度均有影響.因此每批標本都須做好標準管,而不宜從標準曲線查得結果,顯色后的吸光度基本穩定,顯色放在室溫20℃不避光的條件下,吸光度略會增高,但對測定結果影響不大。
3. 甲醛以乙酸丙酮反應產物的吸收峰在415nm,用721型分光光度計時,420nm比色結果滿意。
4. 本法回收試驗及重復性好,準確性能符合臨床要求。